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I
Inhaltsverzeichnis
1.
Grundlagen zur chemischen Reaktion zwischen Biotin und Streptavidin.......................... 1
I.
Ist eine Charakterisierung möglich?................................................................................ 1
II.
Biotin, was ist das? ...................................................................................................... 1
III.
Streptavidin.................................................................................................................. 1
IV.
Wie reagieren die beiden Proteine miteinander? ......................................................... 2
V.
Molekülmassen im Verhältnis ..................................................................................... 2
2.
Wie messe ich die Reaktion? .............................................................................................. 3
I.
Biotin mit Fluoreszenzrest .............................................................................................. 3
II.
Was ist Fluoreszenz? ................................................................................................... 3
III.
Versuchsaufbau ........................................................................................................... 4
3.
Überprüfung des Versuchsaufbaus mithilfe eines Farbstoffes ........................................... 5
4.
Messung zur Untersuchung des Fluoreszenzabfalls bei Zugabe von Streptavidin............. 5
5.
Ungenauigkeiten in der Messreihe...................................................................................... 6
I.
Intensitätsvariation der Fluoreszenz nicht berücksichtigt ............................................... 6
II.
Lösung ......................................................................................................................... 6
6.
Messungen zur Intensitätsvariation und Verdünnung durch dest. Wasser ......................... 6
7.
Messreihe zur Temperaturabhängigkeit des Komplexes .................................................... 8
I.
Darstellung der Fluoreszenzintensität nach der Reaktion bei versch. Temperaturen ..... 8
II.
Schlussfolgerung ......................................................................................................... 8
8.
Messreihe zur Konzentrationsabhängigkeit des Komplexes .............................................. 9
I.
Halbe und doppelte Konzentration an Streptavidin ........................................................ 9
II.
Problem...................................................................................................................... 10
III.
Weitere Konzentrationen ........................................................................................... 10
IV.
Interpretation der Messreihen .................................................................................... 10
9.
Spektrometeraufnahmen bei verschiedenen Konzentrationen.......................................... 11
10.
Abschätzen systematischer Fehler ................................................................................ 12
11.
Fazit und Ausblick ........................................................................................................ 12
12.
Übertragung auf Forschung im Organismus ................................................................. 12
13.
Danksagung ................................................................................................................... III
14.
Quellen .......................................................................................................................... IV
15.
Literaturverzeichnis....................................................................................................... IV
16.
Anhang ........................................................................................................................... V
I.
Funktion zur Berechnung der Anzahl an freien Biotinmolekülen ................................. V